Published September 8, 2022 | Version v1
Publication Open

Development of an indirect ELISA for the identification of African swine fever virus wild-type strains and CD2v-deleted strains

Creators

  • 1. Henan Agricultural University
  • 2. Lanzhou Veterinary Research Institute
  • 3. Chinese Academy of Agricultural Sciences
  • 4. Lanzhou University

Description

African swine fever (ASF) is a potent infectious disease with detrimental effects on the global swine industry and no currently vaccine available. The emergence of low-virulence CD2v-deleted mutants manifested as non-hemadsorption (non-HAD) strains represents a significant challenge to the prevention and control of ASF. In this study, we aimed to establish an indirect ELISA (IELISA) method for the identification of ASFV wild-type and CD2v-deleted strains. We integrated the CD2v protein extracellular domain sequence (CD2v-Ex, 1-588 bp) of the highly pathogenic strain China/2018/AnhuiXCGQ into the genome of suspension culture-adapted Chinese hamster Ovary-S (CHO-S) cells using lentivirus vectors (LVs). By screening, we identified a monoclonal CHO-S cell line that stably expressed secretory CD2v-Ex Protein. We then used the purified CD2v-Ex Protein as the detection antigen to establish an indirect ELISA method (CD2v-IELISA) for identification of the ASFV wild-type and CD2v-Deleted (CD2v-) strains. The CD2v-IELISA method showed excellent specificity with no cross-reaction with serum samples infected with ASFV (CD2v-), porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV), classical swine fever virus (CSFV), porcine circovirus (PCV), porcine pseudorabies virus (PRV), swine foot and mouth disease virus (FMDV) and porcine epidemic diarrhea virus (PEDV). Furthermore, this method showed high sensitivity, allowing identification of ASFV-infected clinical serum samples up to a dilution of 1:2,560. The coefficient of variation both in and between batches was <10% with good reproducibility and a high compliance rate of 99.4%. This CD2v-IELISA method developed here is of great significance for the prevention, control and purification of ASFV.

⚠️ This is an automatic machine translation with an accuracy of 90-95%

Translated Description (Arabic)

حمى الخنازير الأفريقية هي مرض معدي قوي له آثار ضارة على صناعة الخنازير العالمية ولا يوجد لقاح متاح حاليًا. يمثل ظهور طفرات محذوفة من CD2v منخفضة الفوعة والتي تتجلى في سلالات عدم الامتزاز (غير HAD) تحديًا كبيرًا للوقاية من ASF ومكافحته. في هذه الدراسة، استهدفنا إنشاء طريقة ELISA (IELISA) غير المباشرة لتحديد سلالات ASFV البرية وسلالات CD2v المحذوفة. قمنا بدمج تسلسل المجال خارج الخلية لبروتين CD2v (CD2v - Ex، 1-588 bp) من السلالة شديدة الإمراض China/2018/AnhuiXCGQ في جينوم خلايا الهامستر الصيني المبيض- S (CHO - S) المكيفة مع الثقافة باستخدام ناقلات الفيروسات البطيئة (LVs). من خلال الفحص، حددنا سلالة خلايا CHO - S أحادية النسيلة التي تعبر بثبات عن بروتين CD2v - Ex الإفرازي. ثم استخدمنا بروتين CD2v - Ex المنقى كمستضد للكشف لإنشاء طريقة ELISA غير مباشرة (CD2v - IELISA) لتحديد سلالات ASFV البرية و CD2v - المحذوفة (CD2v -). أظهرت طريقة CD2v - IELISA خصوصية ممتازة مع عدم وجود تفاعل متقاطع مع عينات المصل المصابة بـ ASFV (CD2v -)، وفيروس متلازمة الخنازير التناسلية والتنفسية (PRRSV)، وفيروس حمى الخنازير الكلاسيكية (CSFV)، وفيروس الخنازير الدائري (PCV)، وفيروس الخنازير الكاذب (PRV)، وفيروس الحمى القلاعية والفم الخنازير (FMDV) وفيروس الإسهال الوبائي الخنازير (PEDV). علاوة على ذلك، أظهرت هذه الطريقة حساسية عالية، مما يسمح بتحديد عينات المصل السريري المصابة بـ ASFV حتى تخفيف 1:2,560. كان معامل التباين في الدفعات وبينها أقل من 10 ٪ مع قابلية جيدة للتكرار ومعدل امتثال مرتفع قدره 99.4 ٪. تعتبر طريقة CD2v - IELISA المطورة هنا ذات أهمية كبيرة للوقاية من ASFV ومكافحته وتنقيته.

Translated Description (French)

La peste porcine africaine (PPA) est une maladie infectieuse puissante avec des effets néfastes sur l'industrie porcine mondiale et aucun vaccin n'est actuellement disponible. L'émergence de mutants à faible virulence supprimés par CD2v se manifestant sous forme de souches non hémadsorbantes (non HAD) représente un défi important pour la prévention et le contrôle de la PPA. Dans cette étude, nous avons cherché à établir une méthode ELISA indirecte (IELISA) pour l'identification des souches ASFV de type sauvage et CD2v-délétées. Nous avons intégré la séquence du domaine extracellulaire de la protéine CD2v (CD2v-Ex, 1-588 pb) de la souche hautement pathogène China/2018/AnhuiXCGQ dans le génome de cellules Ovary-S (CHO-S) de hamster chinois adaptées à la culture en suspension à l'aide de vecteurs lentiviraux (VL). Par criblage, nous avons identifié une lignée cellulaire monoclonale CHO-S qui exprimait de manière stable la protéine sécrétoire CD2v-Ex. Nous avons ensuite utilisé la protéine CD2v-Ex purifiée comme antigène de détection pour établir une méthode ELISA indirecte (CD2v-IELISA) pour l'identification des souches ASFV de type sauvage et CD2v-Deleted (CD2v-). La méthode CD2v-IELISA a montré une excellente spécificité sans réaction croisée avec des échantillons de sérum infectés par le virus ASFV (CD2v-), le virus du syndrome reproducteur et respiratoire porcin (PRRSV), le virus de la peste porcine classique (CSFV), le circovirus porcin (PCV), le virus de la pseudorabie porcine (PRV), le virus de la fièvre aphteuse du porc (FMDV) et le virus de la diarrhée épidémique du porc (PEDV). De plus, cette méthode a montré une sensibilité élevée, permettant l'identification d'échantillons de sérum cliniques infectés par le VSA jusqu'à une dilution de 1:2 560. Le coefficient de variation à la fois dans et entre les lots était <10% avec une bonne reproductibilité et un taux de conformité élevé de 99,4%. Cette méthode CD2v-IELISA développée ici est d'une grande importance pour la prévention, le contrôle et la purification de l'ASFV.

Translated Description (Spanish)

La peste porcina africana (PPA) es una potente enfermedad infecciosa con efectos perjudiciales en la industria porcina mundial y actualmente no hay vacunas disponibles. La aparición de mutantes con CD2v delecionado de baja virulencia que se manifiestan como cepas sin hemadsorción (no HAD) representa un desafío significativo para la prevención y el control de la PPA. En este estudio, nuestro objetivo fue establecer un método ELISA indirecto (IELISA) para la identificación de cepas de ASFV de tipo salvaje y con CD2v eliminado. Integramos la secuencia del dominio extracelular de la proteína CD2v (CD2v-Ex, 1-588 pb) de la cepa altamente patógena China/2018/AnhuiXCGQ en el genoma de células de ovario de hámster chino S (CHO-S) adaptadas al cultivo en suspensión utilizando vectores de lentivirus (LV). Mediante el cribado, identificamos una línea celular CHO-S monoclonal que expresaba de forma estable la proteína CD2v-Ex secretora. A continuación, utilizamos la proteína CD2v-Ex purificada como antígeno de detección para establecer un método ELISA indirecto (CD2v-IELISA) para la identificación de las cepas ASFV de tipo salvaje y CD2v-Deleted (CD2v-). El método CD2v-IELISA mostró una excelente especificidad sin reacción cruzada con muestras de suero infectadas con ASFV (CD2v-), virus del síndrome reproductivo y respiratorio porcino (PRRSV), virus de la peste porcina clásica (CSFV), circovirus porcino (PCV), virus de la pseudorrabia porcina (PRV), virus de la fiebre aftosa porcina (FMDV) y virus de la diarrea epidémica porcina (PEDV). Además, este método mostró una alta sensibilidad, lo que permitió la identificación de muestras de suero clínico infectadas con ASFV hasta una dilución de 1:2,560. El coeficiente de variación tanto en como entre lotes fue <10% con buena reproducibilidad y una alta tasa de cumplimiento del 99.4%. Este método CD2v-IELISA desarrollado aquí es de gran importancia para la prevención, control y purificación del VPPA.

Files

pdf.pdf

Files (1.1 MB)

⚠️ Please wait a few minutes before your translated files are ready ⚠️ Note: Some files might be protected thus translations might not work.
Name Size Download all
md5:b745fb30f9a6e2c91b24f65c8e6891d4
1.1 MB
Preview Download

Additional details

Additional titles

Translated title (Arabic)
تطوير ELISA غير مباشر لتحديد السلالات البرية لفيروس حمى الخنازير الأفريقية والسلالات المحذوفة من CD2v
Translated title (French)
Développement d'un ELISA indirect pour l'identification des souches sauvages du virus de la peste porcine africaine et des souches à délétion CD2v
Translated title (Spanish)
Desarrollo de un ELISA indirecto para la identificación de cepas de tipo salvaje del virus de la peste porcina africana y cepas con CD2v eliminado

Identifiers

Other
https://openalex.org/W4296111828
DOI
10.3389/fvets.2022.1006895

Is supplement to
https://openalex.org/W4280531054 (Other)
https://openalex.org/W3025858143 (Other)
https://openalex.org/W276063959 (Other)
https://openalex.org/W2380987349 (Other)
https://openalex.org/W2363030188 (Other)
https://openalex.org/W2360467816 (Other)
https://openalex.org/W2357676524 (Other)
https://openalex.org/W2357221062 (Other)
https://openalex.org/W2072159095 (Other)
https://openalex.org/W2021573648 (Other)

GreSIS Basics Section

Is Global South Knowledge
Yes
Country
China

References

  • https://openalex.org/W1492373124
  • https://openalex.org/W1968766152
  • https://openalex.org/W1970558084
  • https://openalex.org/W1978273099
  • https://openalex.org/W1999595668
  • https://openalex.org/W2027783748
  • https://openalex.org/W2032035688
  • https://openalex.org/W2056289299
  • https://openalex.org/W2057510110
  • https://openalex.org/W2096175610
  • https://openalex.org/W2108529855
  • https://openalex.org/W2112078441
  • https://openalex.org/W2147633076
  • https://openalex.org/W2515986932
  • https://openalex.org/W2608656888
  • https://openalex.org/W2613902351
  • https://openalex.org/W2781785017
  • https://openalex.org/W2887996898
  • https://openalex.org/W2917973694
  • https://openalex.org/W2936876280
  • https://openalex.org/W2981124349
  • https://openalex.org/W3004806486
  • https://openalex.org/W3018245422
  • https://openalex.org/W3024846245
  • https://openalex.org/W3134004139
  • https://openalex.org/W3153851923
  • https://openalex.org/W3159819623
  • https://openalex.org/W3163770114
  • https://openalex.org/W3170049930
  • https://openalex.org/W3191437424
  • https://openalex.org/W3206856737
  • https://openalex.org/W3206980598
  • https://openalex.org/W4205664195
  • https://openalex.org/W4221108637
  • https://openalex.org/W4224924586