Published March 26, 2014
| Version v1
Publication
Open
Non-overlapping functions of Nck1 and Nck2 adaptor proteins in T cell activation
Creators
- 1. Naresuan University
- 2. University of Freiburg
Description
Signalling by the T cell antigen receptor (TCR) results in the activation of T lymphocytes. Nck1 and Nck2 are two highly related adaptor proteins downstream of the TCR that each contains three SH3 and one SH2 domains. Their individual functions and the roles of their SH3 domains in human T cells remain mostly unknown. Using specific shRNA we down-regulated the expression of Nck1 or Nck2 to approximately 10% each in Jurkat T cells. We found that down-regulation of Nck1 impaired TCR-induced phosphorylation of the kinases Erk and MEK, activation of the AP-1 and NFAT transcription factors and subsequently, IL-2 and CD69 expression. In sharp contrast, down-regulation of Nck2 hardly impacts these activation read-outs. Thus, in contrast to Nck2, Nck1 is a positive regulator for TCR-induced stimulation of the Erk pathway. Mutation of the third SH3 domain of Nck1 showed that this domain was required for this activity. Further, TCR-induced NFAT activity was reduced in both Nck1 and Nck2 knock-down cells, showing that both isoforms are involved in NFAT activation. Lastly, we show that neither Nck isoform is upstream of p38 phosphorylation or Ca2+influx. In conclusion, Nck1 and Nck2 have non-redundant roles in human T cell activation in contrast to murine T cells.
Translated Descriptions
⚠️
This is an automatic machine translation with an accuracy of 90-95%
Translated Description (Arabic)
تؤدي الإشارات بواسطة مستقبلات مستضد الخلايا التائية (TCR) إلى تنشيط الخلايا الليمفاوية التائية. Nck1 و Nck2 هما بروتينان محولان مرتبطان ارتباطًا وثيقًا أسفل مجرى TCR يحتوي كل منهما على ثلاثة مجالات SH3 و SH2 واحدة. لا تزال وظائفها الفردية وأدوار نطاقات SH3 الخاصة بها في الخلايا التائية البشرية غير معروفة في الغالب. باستخدام الحمض النووي الريبي الشوكي المحدد، قمنا بتقليل التعبير عن Nck1 أو Nck2 إلى حوالي 10 ٪ لكل منهما في خلايا Jurkat T. وجدنا أن انخفاض تنظيم Nck1 أضعف الفسفرة المستحثة بـ TCR في إنزيمات الكيناز Erk و MEK، وتفعيل عوامل النسخ AP -1 و NFAT وبعد ذلك، تعبير IL -2 و CD 69. في تناقض حاد، بالكاد يؤثر خفض تنظيم Nck2 على قراءات التنشيط هذه. وبالتالي، على النقيض من Nck2، فإن Nck1 هو منظم إيجابي للتحفيز الناجم عن TCR لمسار ERK. أظهرت طفرة مجال SH3 الثالث لـ Nck1 أن هذا المجال كان مطلوبًا لهذا النشاط. علاوة على ذلك، تم تقليل نشاط NFAT الناجم عن TCR في كل من الخلايا القاضية Nck1 و Nck2، مما يدل على أن كلا الشكلين المتساويين يشاركان في تنشيط NFAT. أخيرًا، نظهر أنه لا يوجد أي شكل من أشكال Nck في المنبع من فسفرة p38 أو تدفق Ca2 +. في الختام، Nck1 و Nck2 لهما أدوار غير زائدة في تنشيط الخلايا التائية البشرية على النقيض من خلايا الفئران التائية.Translated Description (French)
La signalisation par le récepteur de l'antigène des lymphocytes T (TCR) entraîne l'activation des lymphocytes T. Nck1 et Nck2 sont deux protéines adaptatrices fortement apparentées en aval du TCR qui contiennent chacune trois domaines SH3 et un domaine SH2. Leurs fonctions individuelles et les rôles de leurs domaines SH3 dans les lymphocytes T humains restent pour la plupart inconnus. À l'aide d'ARNsh spécifiques, nous avons régulé à la baisse l'expression de Nck1 ou Nck2 à environ 10 % chacun dans les cellules T Jurkat. Nous avons constaté que la régulation négative de Nck1 altérait la phosphorylation induite par le TCR des kinases Erk et MEK, l'activation des facteurs de transcription AP-1 et NFAT et, par la suite, l'expression de l'IL-2 et de CD69. En contraste frappant, la régulation à la baisse de Nck2 n'a guère d'impact sur ces lectures d'activation. Ainsi, contrairement à Nck2, Nck1 est un régulateur positif pour la stimulation induite par TCR de la voie Erk. La mutation du troisième domaine SH3 de Nck1 a montré que ce domaine était nécessaire pour cette activité. De plus, l'activité NFAT induite par le TCR a été réduite dans les cellules knock-down Nck1 et Nck2, montrant que les deux isoformes sont impliquées dans l'activation NFAT. Enfin, nous montrons qu'aucune des isoformes de Nck n'est en amont de la phosphorylation de la p38 ou de l'afflux de Ca2+. En conclusion, Nck1 et Nck2 ont des rôles non redondants dans l'activation des lymphocytes T humains contrairement aux lymphocytes T murins.Translated Description (Spanish)
La señalización por el receptor de antígenos de células T (TCR) da como resultado la activación de los linfocitos T. Nck1 y Nck2 son dos proteínas adaptadoras altamente relacionadas aguas abajo del TCR que contienen cada una tres dominios SH3 y uno SH2. Sus funciones individuales y los roles de sus dominios SH3 en las células T humanas siguen siendo en su mayoría desconocidos. Usando ARNhc específico, regulamos a la baja la expresión de Nck1 o Nck2 hasta aproximadamente el 10% cada uno en células T Jurkat. Encontramos que la regulación negativa de Nck1 alteró la fosforilación inducida por TCR de las quinasas Erk y MEK, la activación de los factores de transcripción AP-1 y NFAT y, posteriormente, la expresión de IL-2 y CD69. En marcado contraste, la regulación negativa de Nck2 apenas afecta a estas lecturas de activación. Por lo tanto, a diferencia de Nck2, Nck1 es un regulador positivo para la estimulación inducida por TCR de la vía Erk. La mutación del tercer dominio SH3 de Nck1 mostró que este dominio era necesario para esta actividad. Además, la actividad de NFAT inducida por TCR se redujo en las células inactivadas Nck1 y Nck2, lo que demuestra que ambas isoformas están involucradas en la activación de NFAT. Por último, mostramos que ninguna de las isoformas de Nck está aguas arriba de la fosforilación de p38 o de la afluencia de Ca2+. En conclusión, Nck1 y Nck2 tienen papeles no redundantes en la activación de células T humanas en contraste con las células T murinas.Files
1478-811X-12-21.pdf
Files
(2.2 MB)
| Name | Size | Download all |
|---|---|---|
|
md5:ae5b80ba746682c30e319b0f2bfea98d
|
2.2 MB | Preview Download |
Additional details
Additional titles
- Translated title (Arabic)
- وظائف غير متداخلة لبروتينات محول Nck1 و Nck2 في تنشيط الخلايا التائية
- Translated title (French)
- Fonctions non chevauchantes des protéines adaptatrices Nck1 et Nck2 dans l'activation des lymphocytes T
- Translated title (Spanish)
- Funciones no superpuestas de las proteínas adaptadoras Nck1 y Nck2 en la activación de las células T
Identifiers
- Other
- https://openalex.org/W2113634567
- DOI
- 10.1186/1478-811x-12-21
References
- https://openalex.org/W1969632377
- https://openalex.org/W1969971113
- https://openalex.org/W1983237268
- https://openalex.org/W1986594827
- https://openalex.org/W1987785973
- https://openalex.org/W1987889377
- https://openalex.org/W1990633607
- https://openalex.org/W1991210089
- https://openalex.org/W2002430967
- https://openalex.org/W2004668797
- https://openalex.org/W2013191689
- https://openalex.org/W2017078845
- https://openalex.org/W2022204362
- https://openalex.org/W2038600671
- https://openalex.org/W2054172043
- https://openalex.org/W2092917447
- https://openalex.org/W2100412095
- https://openalex.org/W2113809180
- https://openalex.org/W2125753995
- https://openalex.org/W2134855648
- https://openalex.org/W2138197182
- https://openalex.org/W2143302096
- https://openalex.org/W2154893066
- https://openalex.org/W2158447472
- https://openalex.org/W2158775554
- https://openalex.org/W2170910759
- https://openalex.org/W45421301