Published February 6, 2017 | Version v1
Publication Open

Expression, purification and functionality of bioactive recombinant human vascular endothelial growth factor VEGF165 in E. coli

Creators

  • 1. Centre of Biotechnology of Sfax
  • 2. University of Sfax
  • 3. Tunis University
  • 4. Tunis El Manar University
  • 5. Institut Pasteur de Tunis

Description

Vascular endothelial growth factor (VEGF) is associated with tumour growth and metastasis. Because VEGF is the major player in both angiogenesis and vascular permeability and the most explored factor in angio-inhibitory therapies, many expression procedures have been developed to produce functional VEGF165 in convenient yield. In this study, recombinant human VEGF165 was cloned and expressed in Escherichia coli (BL21)-DE3 cells and large scale production was performed by fermentation. A high yield of active soluble protein was obtained after protein extraction employing both lysozyme and sonication treatment. Inclusion bodies were also isolated from the cell lysate and subjected to a simple protocol of solubilisation and refolding. Single-step purification was performed using nickel affinity chromatography and the purified proteins were able to recognize monoclonal Anti-poly-His antibody. The biological activity of the VEGF165 was successfully tested using the Chicken chorioallantoic membrane assay, wound-healing migration and proliferation assay on human umbilical vein endothelial cells (HUVEC).

⚠️ This is an automatic machine translation with an accuracy of 90-95%

Translated Description (Arabic)

يرتبط عامل النمو البطاني الوعائي (VEGF) بنمو الورم والانبثاث. نظرًا لأن VEGF هو اللاعب الرئيسي في كل من تكوين الأوعية ونفاذية الأوعية الدموية والعامل الأكثر استكشافًا في العلاجات المثبطة للأوعية الدموية، فقد تم تطوير العديد من إجراءات التعبير لإنتاج VEGF165 وظيفيًا بعائد مناسب. في هذه الدراسة، تم استنساخ VEGF165 البشري المؤتلف وتم التعبير عنه في خلايا الإشريكية القولونية (BL21)- DE3 وتم إجراء الإنتاج على نطاق واسع عن طريق التخمير. تم الحصول على غلة عالية من البروتين النشط القابل للذوبان بعد استخراج البروتين باستخدام كل من الليزوزيم والعلاج بالصوتنة. كما تم عزل أجسام التضمين من حالة الخلية وإخضاعها لبروتوكول بسيط من الذوبان وإعادة الطي. تم إجراء التنقية أحادية الخطوة باستخدام كروماتوغرافيا تقارب النيكل وكانت البروتينات النقية قادرة على التعرف على الجسم المضاد أحادي النسيلة المضاد للبولي. تم اختبار النشاط البيولوجي لـ VEGF165 بنجاح باستخدام مقايسة الغشاء المشيمي السقائي للدجاج، وهجرة التئام الجروح ومقايسة الانتشار على الخلايا البطانية للوريد السري البشري (HUVEC).

Translated Description (French)

Le facteur de croissance endothélial vasculaire (VEGF) est associé à la croissance tumorale et aux métastases. Parce que le VEGF est le principal acteur de l'angiogenèse et de la perméabilité vasculaire et le facteur le plus exploré dans les thérapies angio-inhibitrices, de nombreuses procédures d'expression ont été développées pour produire du VEGF165 fonctionnel avec un rendement pratique. Dans cette étude, le VEGF165 humain recombinant a été cloné et exprimé dans des cellules Escherichia coli (BL21)-DE3 et une production à grande échelle a été réalisée par fermentation. Un rendement élevé en protéines solubles actives a été obtenu après extraction des protéines en utilisant à la fois le lysozyme et le traitement par sonication. Des corps d'inclusion ont également été isolés du lysat cellulaire et soumis à un protocole simple de solubilisation et de repliement. La purification en une seule étape a été réalisée en utilisant la chromatographie d'affinité au nickel et les protéines purifiées ont pu reconnaître l'anticorps monoclonal Anti-poly-His. L'activité biologique du VEGF165 a été testée avec succès à l'aide du test membranaire chorioallantoïque du poulet, du test de migration et de prolifération de la cicatrisation des plaies sur les cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine (HUVEC).

Translated Description (Spanish)

El factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) se asocia con el crecimiento tumoral y la metástasis. Debido a que el VEGF es el actor principal tanto en la angiogénesis como en la permeabilidad vascular y el factor más explorado en las terapias angioinhibidoras, se han desarrollado muchos procedimientos de expresión para producir VEGF165 funcional con un rendimiento conveniente. En este estudio, se clonó VEGF165 humano recombinante y se expresó en células de Escherichia coli (BL21)-DE3 y se realizó la producción a gran escala mediante fermentación. Se obtuvo un alto rendimiento de proteína soluble activa después de la extracción de proteínas empleando tanto lisozima como tratamiento de sonicación. Los cuerpos de inclusión también se aislaron del lisado celular y se sometieron a un protocolo simple de solubilización y replegamiento. La purificación de una sola etapa se realizó utilizando cromatografía de afinidad de níquel y las proteínas purificadas fueron capaces de reconocer el anticuerpo monoclonal Anti-poli-His. La actividad biológica del VEGF165 se probó con éxito utilizando el ensayo de membrana corioalantoidea de pollo, el ensayo de migración y proliferación de cicatrización de heridas en células endoteliales de la vena umbilical humana (HUVEC).

Files

document.pdf

Files (1.7 MB)

⚠️ Please wait a few minutes before your translated files are ready ⚠️ Note: Some files might be protected thus translations might not work.
Name Size Download all
md5:2f71d5a444231720ddaf39e726d5a73d
1.7 MB
Preview Download

Additional details

Additional titles

Translated title (Arabic)
تعبير وتنقية ووظيفة عامل نمو بطانة الأوعية الدموية البشرية المؤتلف النشط بيولوجيًا VEGF165 في الإشريكية القولونية
Translated title (French)
Expression, purification et fonctionnalité du facteur de croissance endothélial vasculaire humain recombinant bioactif VEGF165 dans E. coli
Translated title (Spanish)
Expresión, purificación y funcionalidad del factor de crecimiento endotelial vascular humano recombinante bioactivo VEGF165 en E. coli

Identifiers

Other
https://openalex.org/W2587617037
DOI
10.1186/s13568-016-0300-2

Is supplement to
https://openalex.org/W2164973678 (Other)
https://openalex.org/W3007305802 (Other)
https://openalex.org/W2366137766 (Other)
https://openalex.org/W2385248168 (Other)
https://openalex.org/W1983750488 (Other)
https://openalex.org/W2328610115 (Other)
https://openalex.org/W2978453733 (Other)
https://openalex.org/W2042805705 (Other)
https://openalex.org/W1991108231 (Other)
https://openalex.org/W3033744570 (Other)

GreSIS Basics Section

Is Global South Knowledge
Yes
Country
Tunisia

References

  • https://openalex.org/W1832582024
  • https://openalex.org/W1869516088
  • https://openalex.org/W1964059120
  • https://openalex.org/W1977338427
  • https://openalex.org/W1978139448
  • https://openalex.org/W1987644022
  • https://openalex.org/W1991958278
  • https://openalex.org/W2002396741
  • https://openalex.org/W2013038209
  • https://openalex.org/W2015344488
  • https://openalex.org/W2017615262
  • https://openalex.org/W2028146869
  • https://openalex.org/W2039146791
  • https://openalex.org/W2039468968
  • https://openalex.org/W2049827480
  • https://openalex.org/W2050499474
  • https://openalex.org/W2055242813
  • https://openalex.org/W2076445958
  • https://openalex.org/W2077401871
  • https://openalex.org/W2078687083
  • https://openalex.org/W2084296948
  • https://openalex.org/W2084739886
  • https://openalex.org/W2099935555
  • https://openalex.org/W2113871339
  • https://openalex.org/W2120585583
  • https://openalex.org/W2144707486
  • https://openalex.org/W2156588304
  • https://openalex.org/W2339838641
  • https://openalex.org/W4211225433
  • https://openalex.org/W4243201910