Published December 1, 2009 | Version v1
Publication Open

ATP stimulates chemokine production via a store-operated calcium entry pathway in C6 glioma cells

Creators

  • 1. University of British Columbia
  • 2. Mahidol University

Description

Glioma present as one of the most challenging cancers to treat, however, understanding of tumor cell biology is not well understood. Extracellular adenosine triphosphate (ATP) could serve as a critical signaling molecule regulating tumor development. This study has examined pharmacological modulation of calcium (Ca2+) entry through store-operated channels (SOC) on cellular expression and production of immune-cell mobilizing chemokines in ATP-stimulated C6 glioma cells.Calcium spectrofluorometry was carried out to measure mobilization of intracellular Ca2+ [Ca2+]i following ATP stimulation of rat C6 glioma cells. Pretreatment with two inhibitors of SOC, SKF96365 or gadolinium, was used to examine for effects on [Ca2+]i. RT-PCR was performed to determine effects of purinergic stimulation on C6 cell expression of metabotropic P2Y receptors (P2YR) and the chemokines, monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) and interleukin-8 (IL-8). ELISA was carried out to measure production of MCP-1 and IL-8 with ATP stimulation of glioma cells.Application of ATP (at 100 microM) to C6 glioma induced an increase in [Ca2+]i with the response exhibiting two components of decay. In the presence of the SOC inhibitors, SKF96365 or gadolinium, or with Ca2+-free solution, ATP responses lacked a slow phase suggesting the secondary component was due to SOC-mediated influx of Ca2+. RT-PCR confirmed expression of purinergic P2Y-subtype receptors in C6 cells which would serve as a precursor to activation of SOC. In addition, ATP-stimulated C6 cells showed enhanced expression of the chemokines, MCP-1 and IL-8, with SKF96365 or gadolinium effective in reducing chemokine expression. Gadolinium treatment of ATP-stimulated C6 cells was also found to inhibit the production of MCP-1 and IL-8.These results suggest ATP-induced Ca2+ entry, mediated by activation of SOC in C6 glioma, as a mechanism leading to increased cellular expression and release of chemokines. Elevated levels of MCP-1 and IL-8 are predicted to enhance the mobility of tumor cells and promote recruitment of microglia into developing tumors thereby supporting tumor growth.

⚠️ This is an automatic machine translation with an accuracy of 90-95%

Translated Description (Arabic)

يوجد الورم الدبقي كواحد من أكثر أنواع السرطان صعوبة في العلاج، ومع ذلك، فإن فهم بيولوجيا الخلايا السرطانية غير مفهوم جيدًا. يمكن أن يعمل ثلاثي فوسفات الأدينوزين خارج الخلية (ATP) كجزيء إشارات حرجة ينظم تطور الورم. درست هذه الدراسة التعديل الدوائي لدخول الكالسيوم (Ca2 +) من خلال القنوات التي تديرها المخازن (SOC) على التعبير الخلوي وإنتاج الكيموكينات المعبئة للخلايا المناعية في خلايا الورم الدبقي C6 المحفزة بـ ATP. تم إجراء قياس طيف الكالسيوم لقياس تعبئة Ca2+ [Ca2 +]i داخل الخلايا بعد تحفيز ATP لخلايا الورم الدبقي C6 للفئران. تم استخدام المعالجة المسبقة بمثبطين لمخزون الكربون العضوي في التربة، SKF96365 أو الجادولينيوم، لفحص التأثيرات على [Ca2 +]i. تم إجراء RT - PCR لتحديد آثار التحفيز البيوريني على التعبير الخلوي C6 لمستقبلات P2Y الميتابوتروبية (P2YR) والكيموكينات والبروتين الكيميائي أحادي الجاذبية 1 (MCP -1) والإنترلوكين 8 (IL -8). تم إجراء ELISA لقياس إنتاج MCP -1 و IL -8 مع تحفيز ATP لخلايا الورم الدبقي. أدى تطبيق ATP (عند 100 ميكرو متر) إلى الورم الدبقي C6 إلى زيادة في [Ca2 +]i مع استجابة تظهر مكونين من الاضمحلال. في وجود مثبطات مخزون الكربون العضوي في التربة، SKF96365 أو الجادولينيوم، أو بمحلول خالٍ من Ca2+، افتقرت استجابات الأدينوسين ثلاثي الفوسفات إلى مرحلة بطيئة مما يشير إلى أن المكون الثانوي كان بسبب تدفق Ca2 + بوساطة مخزون الكربون العضوي في التربة. أكد RT - PCR التعبير عن مستقبلات P2Y من النوع الفرعي في خلايا C6 والتي من شأنها أن تكون بمثابة مقدمة لتنشيط SOC. بالإضافة إلى ذلك، أظهرت خلايا C6 المحفزة بـ ATP تعبيرًا محسنًا عن الكيموكينات، MCP -1 و IL -8، مع SKF96365 أو الجادولينيوم الفعال في تقليل تعبير الكيموكين. تم العثور أيضًا على علاج الجادولينيوم لخلايا C6 المحفزة بـ ATP لتثبيط إنتاج MCP -1 و IL -8. تشير هذه النتائج إلى دخول Ca2 + المستحث بـ ATP، بوساطة تنشيط SOC في الورم الدبقي C6، كآلية تؤدي إلى زيادة التعبير الخلوي وإطلاق الكيموكينات. من المتوقع أن تؤدي المستويات المرتفعة من MCP -1 و IL -8 إلى تعزيز حركة الخلايا السرطانية وتعزيز تجنيد الخلايا الدبقية الدقيقة في تطوير الأورام وبالتالي دعم نمو الورم.

Translated Description (French)

Le gliome est l'un des cancers les plus difficiles à traiter, mais la compréhension de la biologie des cellules tumorales n'est pas bien comprise. L'adénosine triphosphate extracellulaire (ATP) pourrait servir de molécule de signalisation critique régulant le développement tumoral. Cette étude a examiné la modulation pharmacologique de l'entrée du calcium (Ca2+) par les canaux exploités par les magasins (SOC) sur l'expression cellulaire et la production de chimiokines mobilisant les cellules immunitaires dans les cellules de gliome C6 stimulées par l'ATP. La spectrofluorométrie calcique a été réalisée pour mesurer la mobilisation du Ca2+ [Ca2+]i intracellulaire suite à la stimulation par l'ATP des cellules de gliome C6 de rat. Un prétraitement avec deux inhibiteurs du SOC, SKF96365 ou le gadolinium, a été utilisé pour rechercher des effets sur le [Ca2+]i. La RT-PCR a été réalisée pour déterminer les effets de la stimulation purinergique sur l'expression des cellules C6 des récepteurs P2Y métabotropiques (P2YR) et des chimiokines, de la protéine chimioattractante monocytaire-1 (MCP-1) et de l'interleukine-8 (IL-8). ELISA a été réalisé pour mesurer la production de MCP-1 et d'IL-8 avec stimulation ATP des cellules de gliome. L'application d'ATP (à 100 microM) au gliome C6 a induit une augmentation de [Ca2+]i avec la réponse présentant deux composantes de désintégration. En présence des inhibiteurs du SOC, SKF96365 ou gadolinium, ou avec une solution sans Ca2+, les réponses à l'ATP manquaient d'une phase lente suggérant que la composante secondaire était due à un afflux de Ca2+ médié par le SOC. RT-PCR a confirmé l'expression des récepteurs de sous-type P2Y purinergiques dans les cellules C6 qui serviraient de précurseur à l'activation du SOC. De plus, les cellules C6 stimulées par l'ATP ont montré une expression accrue des chimiokines, MCP-1 et IL-8, avec SKF96365 ou le gadolinium efficace pour réduire l'expression des chimiokines. Le traitement au gadolinium des cellules C6 stimulées par l'ATP inhibe également la production de MCP-1 et d'IL-8. Ces résultats suggèrent une entrée de Ca2+ induite par l'ATP, médiée par l'activation du SOC dans le gliome en C6, en tant que mécanisme conduisant à une augmentation de l'expression cellulaire et de la libération de chimiokines. Des niveaux élevés de MCP-1 et d'IL-8 sont prévus pour améliorer la mobilité des cellules tumorales et favoriser le recrutement de la microglie dans les tumeurs en développement, soutenant ainsi la croissance tumorale.

Translated Description (Spanish)

El glioma se presenta como uno de los cánceres más difíciles de tratar, sin embargo, la comprensión de la biología de las células tumorales no se comprende bien. El trifosfato de adenosina extracelular (ATP) podría servir como una molécula de señalización crítica que regula el desarrollo tumoral. Este estudio ha examinado la modulación farmacológica de la entrada de calcio (Ca2+) a través de canales operados por la tienda (SOC) en la expresión celular y la producción de quimiocinas movilizadoras de células inmunitarias en células de glioma C6 estimuladas con ATP. La espectrofluorometría de calcio se llevó a cabo para medir la movilización de Ca2+ [Ca2+]i intracelular después de la estimulación con ATP de células de glioma C6 de rata. Se utilizó el pretratamiento con dos inhibidores de SOC, SKF96365 o gadolinio, para examinar los efectos sobre [Ca2+]i. Se realizó RT-PCR para determinar los efectos de la estimulación purinérgica sobre la expresión celular C6 de los receptores P2Y metabotrópicos (P2YR) y las quimiocinas, la proteína quimioatrayente de monocitos 1 (MCP-1) y la interleucina 8 (IL-8). El ELISA se llevó a cabo para medir la producción de MCP-1 e IL-8 con estimulación de ATP de las células de glioma. La aplicación de ATP (a 100 microM) al glioma C6 indujo un aumento en [Ca2+]i con la respuesta que exhibe dos componentes de descomposición. En presencia de los inhibidores de SOC, SKF96365 o gadolinio, o con solución libre de Ca2+, las respuestas de ATP carecían de una fase lenta, lo que sugiere que el componente secundario se debió a la afluencia de Ca2+ mediada por SOC. RT-PCR confirmó la expresión de receptores purinérgicos del subtipo P2Y en células C6 que servirían como precursor de la activación de SOC. Además, las células C6 estimuladas con ATP mostraron una expresión mejorada de las quimiocinas, MCP-1 e IL-8, con SKF96365 o gadolinio eficaz para reducir la expresión de quimiocinas. También se encontró que el tratamiento con gadolinio de células C6 estimuladas con ATP inhibe la producción de MCP-1 e IL-8. Estos resultados sugieren la entrada de Ca2+ inducida por ATP, mediada por la activación de SOC en el glioma C6, como un mecanismo que conduce a una mayor expresión celular y liberación de quimiocinas. Se predice que los niveles elevados de MCP-1 e IL-8 mejoran la movilidad de las células tumorales y promueven el reclutamiento de microglía en tumores en desarrollo, apoyando así el crecimiento tumoral.

Files

1471-2407-9-442.pdf

Files (581.1 kB)

⚠️ Please wait a few minutes before your translated files are ready ⚠️ Note: Some files might be protected thus translations might not work.
Name Size Download all
md5:c778a3bb2ab2c0d18034288d88ca464c
581.1 kB
Preview Download

Additional details

Additional titles

Translated title (Arabic)
يحفز ATP إنتاج الكيموكين عبر مسار دخول الكالسيوم الذي يديره المتجر في خلايا الورم الدبقي C6
Translated title (French)
L'ATP stimule la production de chimiokines via une voie d'entrée du calcium exploitée par les magasins dans les cellules de gliome C6
Translated title (Spanish)
El ATP estimula la producción de quimiocinas a través de una vía de entrada de calcio operada por la tienda en las células de glioma C6

Identifiers

Other
https://openalex.org/W2092246948
DOI
10.1186/1471-2407-9-442

Is supplement to
https://openalex.org/W4239527473 (Other)
https://openalex.org/W3106437366 (Other)
https://openalex.org/W2988587165 (Other)
https://openalex.org/W2606635442 (Other)
https://openalex.org/W2111623241 (Other)
https://openalex.org/W2085167407 (Other)
https://openalex.org/W2067420095 (Other)
https://openalex.org/W2015611797 (Other)
https://openalex.org/W1981721041 (Other)
https://openalex.org/W1981299966 (Other)

GreSIS Basics Section

Is Global South Knowledge
Yes
Country
Thailand

References

  • https://openalex.org/W1499941256
  • https://openalex.org/W1520563745
  • https://openalex.org/W1528781834
  • https://openalex.org/W1815757713
  • https://openalex.org/W1817907868
  • https://openalex.org/W1976578289
  • https://openalex.org/W1981657871
  • https://openalex.org/W1989868369
  • https://openalex.org/W1990474202
  • https://openalex.org/W1993374742
  • https://openalex.org/W1996964000
  • https://openalex.org/W2013030279
  • https://openalex.org/W2018533735
  • https://openalex.org/W2026493967
  • https://openalex.org/W2027005728
  • https://openalex.org/W2027185351
  • https://openalex.org/W2028321992
  • https://openalex.org/W2029728509
  • https://openalex.org/W2031671747
  • https://openalex.org/W2048898424
  • https://openalex.org/W2050364555
  • https://openalex.org/W2054924316
  • https://openalex.org/W2065854120
  • https://openalex.org/W2068449845
  • https://openalex.org/W2069075656
  • https://openalex.org/W2098967194
  • https://openalex.org/W2129269004
  • https://openalex.org/W2144283038
  • https://openalex.org/W2171634952
  • https://openalex.org/W2172123832