Published January 1, 2011
| Version v1
Publication
Open
Detection of<i>Mycobacterium avium</i>subsp.<i>paratuberculosis</i>by a Direct In Situ PCR Method
Creators
- 1. Instituto Nacional de Ciencias Médicas y Nutrición Salvador Zubirán
Description
In situ detection of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis is useful for diagnosis and research of paratuberculosis. The aim of this paper was to detect this agent in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue samples by a direct in situ PCR. The technique was performed on ileum or ileocaecal lymph node samples from 8 naturally infected cattle and 1 healthy calf, by using p89 and p92 primers for amplification of IS900 sequence. Moderate positive signal was detected in all positive samples and not in negative control, but tissues resulted were affected in many cases due to the enzymatic treatment and the high temperature exposition. Although the technique was useful for Map detection, the signal was lower than immunohistochemistry probably because of the fixation process. In one case, signal was higher, which might be due to the detection of spheroplasts. Thus, the described method should be recommended when others resulted negative or for spheroplasts detection.
Translated Descriptions
⚠️
This is an automatic machine translation with an accuracy of 90-95%
Translated Description (Arabic)
الكشف في الموقع عن المتفطرة الطيرية الفرعية. مرض نظير السل مفيد لتشخيص وبحث مرض نظير السل. كان الهدف من هذه الورقة هو اكتشاف هذا العامل في عينات الأنسجة المثبتة بالفورمالين والمضمنة بالبارافين عن طريق تفاعل البوليميراز المتسلسل المباشر في الموقع. تم إجراء هذه التقنية على عينات العقدة الليمفاوية اللفائفية أو العظمية اللفائفية من 8 ماشية مصابة بشكل طبيعي وعجل واحد سليم، باستخدام بادئات p89 و p92 لتضخيم تسلسل IS900. تم الكشف عن إشارة إيجابية معتدلة في جميع العينات الإيجابية وليس في التحكم السلبي، ولكن تأثرت الأنسجة الناتجة في كثير من الحالات بسبب العلاج الأنزيمي والتعرض لدرجة حرارة عالية. على الرغم من أن هذه التقنية كانت مفيدة للكشف عن الخريطة، إلا أن الإشارة كانت أقل من الكيمياء النسيجية المناعية ربما بسبب عملية التثبيت. في إحدى الحالات، كانت الإشارة أعلى، والتي قد تكون بسبب الكشف عن الخلايا الكروية. وبالتالي، يجب التوصية بالطريقة الموصوفة عندما ينتج عن الطرق الأخرى نتائج سلبية أو للكشف عن الأرومات الكروية.Translated Description (French)
La détection in situ de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis est utile pour le diagnostic et la recherche de la paratuberculose. Le but de cet article était de détecter cet agent dans des échantillons de tissus fixés au formol et inclus en paraffine par une PCR directe in situ. La technique a été réalisée sur des échantillons d'iléon ou de ganglions lymphatiques iléo-caecaux provenant de 8 bovins naturellement infectés et 1 veau en bonne santé, en utilisant des amorces p89 et p92 pour l'amplification de la séquence IS900. Un signal positif modéré a été détecté dans tous les échantillons positifs et non dans le contrôle négatif, mais les tissus qui en ont résulté ont été affectés dans de nombreux cas en raison du traitement enzymatique et de l'exposition à haute température. Bien que la technique soit utile pour la détection Map, le signal était inférieur à l'immunohistochimie probablement en raison du processus de fixation. Dans un cas, le signal était plus élevé, ce qui pourrait être dû à la détection de sphéroplastes. Ainsi, la méthode décrite doit être recommandée lorsque d'autres résultats sont négatifs ou pour la détection des sphéroplastes.Translated Description (Spanish)
La detección in situ de Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis es útil para el diagnóstico y la investigación de la paratuberculosis. El objetivo de este trabajo fue detectar este agente en muestras de tejido fijadas en formalina e incrustadas en parafina mediante una PCR directa in situ. La técnica se realizó en muestras de íleon o ganglios linfáticos ileocecales de 8 bovinos infectados naturalmente y 1 ternero sano, mediante el uso de cebadores p89 y p92 para la amplificación de la secuencia IS900. Se detectó una señal positiva moderada en todas las muestras positivas y no en el control negativo, pero los tejidos resultantes se vieron afectados en muchos casos debido al tratamiento enzimático y la exposición a altas temperaturas. Aunque la técnica fue útil para la detección de Map, la señal fue menor que la inmunohistoquímica probablemente debido al proceso de fijación. En un caso, la señal fue mayor, lo que podría deberse a la detección de esferoplastos. Por lo tanto, el método descrito debe recomendarse cuando otros resultaron negativos o para la detección de esferoplastos.Files
267102.pdf.pdf
Files
(16.0 kB)
| Name | Size | Download all |
|---|---|---|
|
md5:24497f869748a2367a4b6f1a5dec083c
|
16.0 kB | Preview Download |
Additional details
Additional titles
- Translated title (Arabic)
- الكشف عن<i>المتفطرة الطيرية</i>الفرعية.<i></i> نظير السل بطريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل المباشر في الموقع
- Translated title (French)
- Détection de<i>Mycobacterium avium</i>subsp.<i>paratuberculosis</i>par une méthode PCR directe in situ
- Translated title (Spanish)
- Detección de<i>Mycobacterium avium</i>subsp.<i>paratuberculosis</i>mediante un método de PCR directa in situ
Identifiers
- Other
- https://openalex.org/W2092367708
- DOI
- 10.4061/2011/267102
References
- https://openalex.org/W1910522942
- https://openalex.org/W1988338328
- https://openalex.org/W1997066391
- https://openalex.org/W2018860871
- https://openalex.org/W2023426238
- https://openalex.org/W2048037290
- https://openalex.org/W2080988077
- https://openalex.org/W2111457265
- https://openalex.org/W2122200660
- https://openalex.org/W2124001620
- https://openalex.org/W2141195470
- https://openalex.org/W2152967426
- https://openalex.org/W2402792867