Published May 30, 2007
| Version v1
Publication
Open
Regulation of p73 by Hck through kinase-dependent and independent mechanisms
- 1. Centre for Cellular and Molecular Biology
Description
p73, a p53 family member is a transcription factor that plays a role in cell cycle, differentiation and apoptosis. p73 is regulated through post translational modifications and protein interactions. c-Abl is the only known tyrosine kinase that phosphorylates and activates p73. Here we have analyzed the role of Src family kinases, which are involved in diverse signaling pathways, in regulating p73.Exogenously expressed as well as cellular Hck and p73 interact in vivo. In vitro binding assays show that SH3 domain of Hck interacts with p73. Co-expression of p73 with Hck or c-Src in mammalian cells resulted in tyrosine phosphorylation of p73. Using site directed mutational analysis, we determined that Tyr-28 was the major site of phosphorylation by Hck and c-Src, unlike c-Abl which phosphorylates Tyr-99. In a kinase dependent manner, Hck co-expression resulted in stabilization of p73 protein in the cytoplasm. Activation of Hck in HL-60 cells resulted in tyrosine phosphorylation of endogenous p73. Both exogenous and endogenous Hck localize to the nuclear as well as cytoplasmic compartment, just as does p73. Ectopically expressed Hck repressed the transcriptional activity of p73 as determined by promoter assays and semi-quantitative RT-PCR analysis of the p73 target, Ipaf and MDM2. SH3 domain- dependent function of Hck was required for its effect on p73 activity, which was also reflected in its ability to inhibit p73-mediated apoptosis. We also show that Hck interacts with Yes associated protein (YAP), a transcriptional co-activator of p73, and shRNA mediated knockdown of YAP protein reduces p73 induced Ipaf promoter activation.We have identified p73 as a novel substrate and interacting partner of Hck and show that it regulates p73 through mechanisms that are dependent on either catalytic activity or protein interaction domains. Hck-SH3 domain-mediated interactions play an important role in the inhibition of p73-dependent transcriptional activation of a target gene, Ipaf, as well as apoptosis.
Translated Descriptions
⚠️
This is an automatic machine translation with an accuracy of 90-95%
Translated Description (Arabic)
p73، أحد أفراد عائلة p53 هو عامل نسخ يلعب دورًا في دورة الخلية والتمايز والاستماتة. يتم تنظيم p73 من خلال تعديلات ما بعد الانتقال وتفاعلات البروتين. c - Abl هو كيناز التيروزين الوحيد المعروف الذي يقوم بفسفرة وتنشيط p73. لقد قمنا هنا بتحليل دور كينازات عائلة SRC، التي تشارك في مسارات الإشارات المتنوعة، في تنظيم تفاعل p73.Exogenically وكذلك Hck الخلوي و p73 في الجسم الحي. تظهر فحوصات الربط المختبرية أن مجال SH3 من Hck يتفاعل مع p73. أدى التعبير المشترك عن p73 مع Hck أو c - SRc في خلايا الثدييات إلى فسفرة التيروزين لـ p73. باستخدام التحليل الطفري الموجه للموقع، قررنا أن Tyr -28 كان الموقع الرئيسي للفسفرة بواسطة Hck و c - SRc، على عكس c - Abl الذي يقوم بفسفرة Tyr -99. بطريقة تعتمد على الكيناز، أدى التعبير المشترك للهيدروكربونات إلى استقرار بروتين p73 في السيتوبلازم. أدى تنشيط HHC في خلايا HL -60 إلى فسفرة التيروزين للصفحة 73 الداخلية. يتم توطين كل من HHC الخارجي والداخلي في الحجرة النووية وكذلك الحجرة السيتوبلازمية، تمامًا كما تفعل p73. قمع Hck المعبر عنه خارج الرحم النشاط النصي لـ p73 على النحو الذي تحدده فحوصات المروج وتحليل RT - PCR شبه الكمي لهدف p73، Ipaf و MDM2. كانت الوظيفة المعتمدة على مجال SH3 من Hck مطلوبة لتأثيرها على نشاط p73، والذي انعكس أيضًا في قدرتها على تثبيط موت الخلايا المبرمج بوساطة p73. نظهر أيضًا أن Hck يتفاعل مع YES المرتبطة بالبروتين (YAP)، وهو منشط مشترك للنسخ من p73، و shRNA بوساطة ضربة قاضية لبروتين YAP يقلل من تنشيط معزز Ipaf المستحث من p73. لقد حددنا p73 كركيزة جديدة وشريك متفاعل لـ Hck وأظهرنا أنه ينظم p73 من خلال آليات تعتمد على أي من النشاط التحفيزي أو مجالات تفاعل البروتين. تلعب التفاعلات بوساطة مجال Hck - SH3 دورًا مهمًا في تثبيط التنشيط النصي المعتمد على p73 لجين مستهدف، Ipaf، وكذلك موت الخلايا المبرمج.Translated Description (French)
p73, un membre de la famille p53 est un facteur de transcription qui joue un rôle dans le cycle cellulaire, la différenciation et l'apoptose. p73 est régulé par des modifications post-traductionnelles et des interactions protéiques. c-Abl est la seule tyrosine kinase connue qui phosphoryle et active p73. Ici, nous avons analysé le rôle des kinases de la famille Src, qui sont impliquées dans diverses voies de signalisation, dans la régulation de p73.Exogenously expressed as well as cellular Hck and p73 interact in vivo. Les essais de liaison in vitro montrent que le domaine SH3 de Hck interagit avec p73. La co-expression de p73 avec Hck ou c-Src dans les cellules de mammifères a entraîné la phosphorylation de la tyrosine de p73. À l'aide d'une analyse mutationnelle dirigée par site, nous avons déterminé que Tyr-28 était le site principal de phosphorylation par Hck et c-Src, contrairement à c-Abl qui phosphoryle Tyr-99. De manière dépendante de la kinase, la co-expression de Hck a entraîné la stabilisation de la protéine p73 dans le cytoplasme. L'activation de Hck dans les cellules HL-60 a entraîné une phosphorylation de la tyrosine de la p73 endogène. L'Hck exogène et endogène se localise dans le compartiment nucléaire ainsi que dans le compartiment cytoplasmique, tout comme p73. Hck exprimé de manière ectopique réprime l'activité transcriptionnelle de p73 telle que déterminée par des dosages de promoteurs et une analyse RT-PCR semi-quantitative de la cible p73, Ipaf et MDM2. La fonction dépendante du domaine SH3 de Hck était nécessaire pour son effet sur l'activité de p73, ce qui se reflétait également dans sa capacité à inhiber l'apoptose médiée par p73. Nous montrons également que Hck interagit avec la protéine associée à Yes (YAP), un co-activateur transcriptionnel de p73, et que l'inactivation de la protéine YAP par l'ARNsh réduit l'activation du promoteur Ipaf induite par p73. Nous avons identifié p73 comme un nouveau substrat et un partenaire d'interaction de Hck et montrons qu'il régule p73 par des mécanismes qui dépendent de l'activité catalytique ou des domaines d'interaction protéique. Les interactions médiées par le domaine Hck-SH3 jouent un rôle important dans l'inhibition de l'activation transcriptionnelle p73-dépendante d'un gène cible, Ipaf, ainsi que dans l'apoptose.Translated Description (Spanish)
p73, un miembro de la familia p53 es un factor de transcripción que desempeña un papel en el ciclo celular, la diferenciación y la apoptosis. p73 se regula a través de modificaciones postraduccionales e interacciones de proteínas. c-Abl es la única tirosina quinasa conocida que fosforila y activa p73. Aquí hemos analizado el papel de las quinasas de la familia Src, que están involucradas en diversas vías de señalización, en la regulación de p73. Expresadas exógenamente, así como Hck celular y p73 interactúan in vivo. Los ensayos de unión in vitro muestran que el dominio SH3 de Hck interactúa con p73. La coexpresión de p73 con Hck o c-Src en células de mamífero dio como resultado la fosforilación de tirosina de p73. Usando análisis mutacional dirigido al sitio, determinamos que Tyr-28 era el sitio principal de fosforilación por Hck y c-Src, a diferencia de c-Abl que fosforila Tyr-99. De una manera dependiente de la quinasa, la coexpresión de Hck dio como resultado la estabilización de la proteína p73 en el citoplasma. La activación de Hck en células HL-60 dio como resultado la fosforilación de tirosina de p73 endógena. Tanto la Hck exógena como la endógena se localizan en el compartimento nuclear y citoplasmático, al igual que la p73. La Hck expresada ectópicamente reprimió la actividad transcripcional de p73 según lo determinado por los ensayos del promotor y el análisis RT-PCR semicuantitativo de la diana de p73, Ipaf y MDM2. Se requirió la función dependiente del dominio SH3 de Hck por su efecto sobre la actividad de p73, que también se reflejó en su capacidad para inhibir la apoptosis mediada por p73. También mostramos que Hck interactúa con la proteína asociada a Yes (YAP), un coactivador transcripcional de p73, y la inactivación mediada por ARNhc de la proteína YAP reduce la activación del promotor Ipaf inducida por p73. Hemos identificado p73 como un nuevo sustrato y compañero de interacción de Hck y mostramos que regula p73 a través de mecanismos que dependen de la actividad catalítica o de los dominios de interacción de proteínas. Las interacciones mediadas por el dominio Hck-SH3 desempeñan un papel importante en la inhibición de la activación transcripcional dependiente de p73 de un gen diana, Ipaf, así como en la apoptosis.Files
1471-2199-8-45.pdf
Files
(4.7 MB)
| Name | Size | Download all |
|---|---|---|
|
md5:d337c4714b77a449b739d9e3bba301cf
|
4.7 MB | Preview Download |
Additional details
Additional titles
- Translated title (Arabic)
- تنظيم p73 بواسطة Hck من خلال آليات مستقلة تعتمد على الكيناز
- Translated title (French)
- Régulation de la p73 par Hck par des mécanismes dépendants et indépendants de la kinase
- Translated title (Spanish)
- Regulación de p73 por Hck a través de mecanismos dependientes e independientes de la quinasa
Identifiers
- Other
- https://openalex.org/W2001205592
- DOI
- 10.1186/1471-2199-8-45
References
- https://openalex.org/W1531240647
- https://openalex.org/W1555846481
- https://openalex.org/W1561582039
- https://openalex.org/W1590583667
- https://openalex.org/W1675096266
- https://openalex.org/W1774422881
- https://openalex.org/W1920673175
- https://openalex.org/W1939117974
- https://openalex.org/W1946332788
- https://openalex.org/W1969784891
- https://openalex.org/W1971166655
- https://openalex.org/W1974861468
- https://openalex.org/W1980183676
- https://openalex.org/W1985064409
- https://openalex.org/W1987350712
- https://openalex.org/W1993939968
- https://openalex.org/W2003044806
- https://openalex.org/W2005389118
- https://openalex.org/W2012369648
- https://openalex.org/W2014162746
- https://openalex.org/W2014637971
- https://openalex.org/W2016207825
- https://openalex.org/W2022423243
- https://openalex.org/W2033250227
- https://openalex.org/W2042042897
- https://openalex.org/W2044036865
- https://openalex.org/W2046899903
- https://openalex.org/W2055712284
- https://openalex.org/W2065812567
- https://openalex.org/W2067290518
- https://openalex.org/W2068675259
- https://openalex.org/W2068735155
- https://openalex.org/W2070591283
- https://openalex.org/W2071109945
- https://openalex.org/W2071407262
- https://openalex.org/W2071960321
- https://openalex.org/W2081553314
- https://openalex.org/W2081574093
- https://openalex.org/W2085317811
- https://openalex.org/W2089834044
- https://openalex.org/W2091322376
- https://openalex.org/W2095242471
- https://openalex.org/W2101257013
- https://openalex.org/W2101910453
- https://openalex.org/W2106031335
- https://openalex.org/W2109483078
- https://openalex.org/W2110789444
- https://openalex.org/W2110803617
- https://openalex.org/W2115051410
- https://openalex.org/W2122149778
- https://openalex.org/W2122976298
- https://openalex.org/W2126390187
- https://openalex.org/W2126787895
- https://openalex.org/W2136683006
- https://openalex.org/W2146464144
- https://openalex.org/W2158575722
- https://openalex.org/W2160345685
- https://openalex.org/W2162373147
- https://openalex.org/W2164097208
- https://openalex.org/W2164712283
- https://openalex.org/W2167090663
- https://openalex.org/W2281057788
- https://openalex.org/W2316798217
- https://openalex.org/W2317154524
- https://openalex.org/W2399702748
- https://openalex.org/W2400874461
- https://openalex.org/W2402063966
- https://openalex.org/W2420261682
- https://openalex.org/W27407150
- https://openalex.org/W94709363