Published February 16, 2016 | Version v1
Publication Open

Production, Characterization, and Epitope Mapping of Monoclonal Antibodies Against Different Subtypes of Rabbit Hemorrhagic Disease Virus (RHDV)

Creators

  • 1. Harbin Veterinary Research Institute
  • 2. Chinese Academy of Agricultural Sciences

Description

Abstract In 2010, a new rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) variant, designated RHDV2, was identified for the first time in Italy. Studies have shown that RHDV2 differs from RHDV1 (traditional RHDV) in terms of its antigenic profile and genetic characteristics. The VP60 protein of RHDV is a structural protein that plays important roles in viral replication, assembly, and immunogenicity. In this study, we immunized BALB/c mice with recombinant VP60 proteins from different RHDV subtypes. After three rounds of subcloning, type-specific positive hybridoma clones of RHDV1 and RHDV2 were further identified by an enzyme-linked immunosorbent assay, Western blotting, and an indirect immunofluorescence assay. Finally, three monoclonal antibodies (MAbs) (1D6, 1H2, and 3F2) that only recognize RHDV1, and four MAbs (1G2, 2C1, 3B7, and 5D6) that only recognize RHDV2 were identified. The epitopes recognized by these MAbs were mapped by Western blotting. Sequence analysis showed that the epitope sequences recognized by 1D6, 1H2, and 3F2 are highly conserved (98%) among RHDV1 strains, whereas the epitope sequences recognized by 1G2, 2C1, 3B7, and 5D6 are 100% conserved among RHDV2 strains. The high conservation of the epitope sequence showed that the screened MAbs were type-specific, and that they could distinguish different RHDV subtypes.

⚠️ This is an automatic machine translation with an accuracy of 90-95%

Translated Description (Arabic)

ملخص في عام 2010، تم تحديد متغير جديد لفيروس مرض نزيف الأرانب (RHDV)، المسمى RHDV2، لأول مرة في إيطاليا. أظهرت الدراسات أن RHDV2 يختلف عن RHDV1 (RHDV1 التقليدي) من حيث خصائصه المستضدية وخصائصه الجينية. بروتين VP60 من RHDV هو بروتين هيكلي يلعب أدوارًا مهمة في التكاثر الفيروسي والتجمع والمناعة. في هذه الدراسة، قمنا بتحصين فئران BALB/c ببروتينات VP60 المؤتلفة من أنواع فرعية مختلفة من RHDV. بعد ثلاث جولات من الاستنساخ الفرعي، تم تحديد استنساخ ورم هجين إيجابي محدد النوع من RHDV1 و RHDV2 بشكل أكبر من خلال مقايسة الامتصاص المناعي المرتبطة بالإنزيم، والنشاف الغربي، ومقايسة التألق المناعي غير المباشر. أخيرًا، تم تحديد ثلاثة أجسام مضادة أحادية النسيلة (MABS) (1d6 و 1H2 و 3F2) تتعرف فقط على RHDV1، وأربعة أجسام مضادة أحادية النسيلة (1G2 و 2C1 و 3B7 و 5D6) تتعرف فقط على RHDV2. تم تعيين القمم اللاصقة التي اعترف بها هؤلاء MABS بواسطة النشاف الغربي. أظهر تحليل التسلسل أن تسلسلات الحاتمة التي تم التعرف عليها بواسطة 1d6 و 1H2 و 3F2 محفوظة بشكل كبير (98 ٪) بين سلالات RHDV1، في حين أن تسلسلات الحاتمة التي تم التعرف عليها بواسطة 1G2 و 2C1 و 3B7 و 5D6 محفوظة بنسبة 100 ٪ بين سلالات RHDV2. أظهر الحفظ العالي لتسلسل الحاتمة أن MAbs التي تم فحصها كانت خاصة بالنوع، وأنها يمكن أن تميز الأنواع الفرعية المختلفة من RHDV.

Translated Description (French)

Résumé En 2010, une nouvelle variante du virus de la maladie hémorragique du lapin (RHDV), désignée RHDV2, a été identifiée pour la première fois en Italie. Des études ont montré que RHDV2 diffère de RHDV1 (RHDV traditionnel) en termes de profil antigénique et de caractéristiques génétiques. La protéine VP60 du RHDV est une protéine structurelle qui joue un rôle important dans la réplication, l'assemblage et l'immunogénicité du virus. Dans cette étude, nous avons immunisé des souris BALB/c avec des protéines VP60 recombinantes de différents sous-types de RHDV. Après trois cycles de sous-clonage, les clones d'hybridomes positifs spécifiques au type de RHDV1 et RHDV2 ont été identifiés par un test immunosorbant lié à l'enzyme, un transfert Western et un test d'immunofluorescence indirect. Enfin, trois anticorps monoclonaux (MAbs) (1D6, 1H2 et 3F2) qui ne reconnaissent que RHDV1 et quatre MAbs (1G2, 2C1, 3B7 et 5D6) qui ne reconnaissent que RHDV2 ont été identifiés. Les épitopes reconnus par ces MAbs ont été cartographiés par Western blot. L'analyse des séquences a montré que les séquences d'épitopes reconnues par 1D6, 1H2 et 3F2 sont hautement conservées (98%) parmi les souches RHDV1, alors que les séquences d'épitopes reconnues par 1G2, 2C1, 3B7 et 5D6 sont conservées à 100% parmi les souches RHDV2. La conservation élevée de la séquence d'épitopes a montré que les MAbs criblés étaient spécifiques au type et qu'ils pouvaient distinguer différents sous-types de RHDV.

Translated Description (Spanish)

Resumen En 2010, se identificó por primera vez en Italia una nueva variante del virus de la enfermedad hemorrágica del conejo (RHDV), denominada RHDV2. Los estudios han demostrado que RHDV2 difiere de RHDV1 (RHDV tradicional) en términos de su perfil antigénico y características genéticas. La proteína VP60 del RHDV es una proteína estructural que desempeña funciones importantes en la replicación, el ensamblaje y la inmunogenicidad virales. En este estudio, inmunizamos ratones BALB/c con proteínas VP60 recombinantes de diferentes subtipos de RHDV. Después de tres rondas de subclonación, los clones de hibridoma positivos específicos de tipo de RHDV1 y RHDV2 se identificaron adicionalmente mediante un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas, transferencia Western y un ensayo de inmunofluorescencia indirecta. Finalmente, se identificaron tres anticuerpos monoclonales (MAb) (1D6, 1H2 y 3F2) que solo reconocen RHDV1 y cuatro MAb (1G2, 2C1, 3B7 y 5D6) que solo reconocen RHDV2. Los epítopos reconocidos por estos MAb se mapearon mediante transferencia Western. El análisis de secuencia mostró que las secuencias de epítopos reconocidas por 1D6, 1H2 y 3F2 están altamente conservadas (98%) entre las cepas de RHDV1, mientras que las secuencias de epítopos reconocidas por 1G2, 2C1, 3B7 y 5D6 están 100% conservadas entre las cepas de RHDV2. El alto nivel de protección de la secuencia del epítopo mostró que los MAb seleccionados eran específicos del tipo y que podían distinguir diferentes subtipos de RHDV.

Files

srep20857.pdf.pdf

Files (2.8 MB)

⚠️ Please wait a few minutes before your translated files are ready ⚠️ Note: Some files might be protected thus translations might not work.
Name Size Download all
md5:3b486568d1984573ccfdf9f07247e4f7
2.8 MB
Preview Download

Additional details

Additional titles

Translated title (Arabic)
إنتاج وتوصيف ورسم خرائط حاتمية للأجسام المضادة وحيدة النسيلة ضد الأنواع الفرعية المختلفة لفيروس مرض نزيف الأرانب (RHDV)
Translated title (French)
Production, caractérisation et cartographie des épitopes des anticorps monoclonaux contre différents sous-types du virus de la maladie hémorragique du lapin (RHDV)
Translated title (Spanish)
Producción, caracterización y mapeo de epítopos de anticuerpos monoclonales contra diferentes subtipos del virus de la enfermedad hemorrágica del conejo (RHDV)

Identifiers

Other
https://openalex.org/W2286140611
DOI
10.1038/srep20857

Is supplement to
https://openalex.org/W4214932605 (Other)
https://openalex.org/W4214758967 (Other)
https://openalex.org/W3189724180 (Other)
https://openalex.org/W3096915742 (Other)
https://openalex.org/W2471846512 (Other)
https://openalex.org/W2393351343 (Other)
https://openalex.org/W2331458684 (Other)
https://openalex.org/W2019183242 (Other)
https://openalex.org/W2019166448 (Other)
https://openalex.org/W1997902072 (Other)

GreSIS Basics Section

Is Global South Knowledge
Yes
Country
China

References

  • https://openalex.org/W1558571012
  • https://openalex.org/W1701327453
  • https://openalex.org/W1859748603
  • https://openalex.org/W1938586601
  • https://openalex.org/W1976027494
  • https://openalex.org/W1978354308
  • https://openalex.org/W1980244222
  • https://openalex.org/W1981580819
  • https://openalex.org/W1991132346
  • https://openalex.org/W2008985951
  • https://openalex.org/W2010758074
  • https://openalex.org/W2010788940
  • https://openalex.org/W2011233531
  • https://openalex.org/W2015127138
  • https://openalex.org/W2018837708
  • https://openalex.org/W2038207778
  • https://openalex.org/W2041818560
  • https://openalex.org/W2046182783
  • https://openalex.org/W2046189572
  • https://openalex.org/W2067400470
  • https://openalex.org/W2072998848
  • https://openalex.org/W2082630645
  • https://openalex.org/W2095567883
  • https://openalex.org/W2099652865
  • https://openalex.org/W2106699106
  • https://openalex.org/W2114531230
  • https://openalex.org/W2117631628
  • https://openalex.org/W2129727364
  • https://openalex.org/W2130775348
  • https://openalex.org/W2152993473
  • https://openalex.org/W2157327537
  • https://openalex.org/W2166826995
  • https://openalex.org/W2167360752
  • https://openalex.org/W2188478563
  • https://openalex.org/W2468658448